Estudo do papel biológico das elicitinas de Phytophthora cinnamomi e do seu env...

• Autor(es): Horta, M.
• Data: 2006
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10400.1/543
• Origem: Sapientia - Universidade do Algarve
• Assunto(s): Teses; Biologia molecular; Parasitas; Phytophthora cinnamomi; Quercus suber
• Tipo de Documento: Tese de Doutoramento
• Idioma: Português
• Orientador(es): Cravador, A.

Descrição

Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2006 Phytophthora cinnamomi, oomiceta parasita das raízes de Quercus suber, excreta abundantemente cinamominas, proteínas da família das elicitinas. Foi demonstrada a interacção destas proteínas com vários tipos de moléculas lipídicas mas desconhece-se o seu papel biológico. Neste trabalho foi induzido o silenciamento do gene codificante para a β-cinamomina, após transformação genética de protoplastos por meios químicos (lipossomas e CaCl2/PEG) com uma sequência anti-sentido do gene βcin. A selecção dos transformantes foi realizada através da co-transformação com um gene que conferiu resistência à higromicina B. A presença dos transgenes foi certificada por PCR. A ausência da proteína em meios de cultura foi confirmada através de western blotting, aplicando anticorpos monoclonais anti-b- cinamomina, e a ausência do respectivo RNAm foi comprovada com quantificação por RTPCR em tempo real, observando-se também uma diminuição na expressão de genes codificantes para outras elicitinas. Testes de patogenicidade realizados em Q. suber com o único co-transformante estável obtido (resistente ao antibiótico e com gene βcin silenciado), com um transformante simples (resistente ao antibiótico) e com os respectivos isolamentos selvagens revelaram uma diminuição de patogenicidade na estirpe com o gene βcin silenciado, que não pode ser atribuída à simples presença do gene de resistência. Perfis de expressão genética obtidos por cDNA-AFLP revelaram diferenças marcantes entre co-transformante e isolamento selvagem e a sequenciação de alguns fragmentos diferencialmente transcritos revelou que estes estão potencialmente associados à expressão do gene cinβ, destacando-se entre eles um gene associado ao metabolismo de ácidos gordos.