Author(s):
Horta, M. 
Date: 2006
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.1/543
Origin: Sapientia - Universidade do Algarve
Subject(s): Teses; Biologia molecular; Parasitas; Phytophthora cinnamomi; Quercus suber
Document details
Estudo do papel biológico das elicitinas de Phytophthora cinnamomi e do seu env...
Description
Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2006 Phytophthora cinnamomi, oomiceta parasita das raízes de Quercus suber, excreta abundantemente cinamominas, proteínas da família das elicitinas. Foi demonstrada a interacção destas proteínas com vários tipos de moléculas lipídicas mas desconhece-se o seu papel biológico. Neste trabalho foi induzido o silenciamento do gene codificante para a β-cinamomina, após transformação genética de protoplastos por meios químicos (lipossomas e CaCl2/PEG) com uma sequência anti-sentido do gene βcin. A selecção dos transformantes foi realizada através da co-transformação com um gene que conferiu resistência à higromicina B. A presença dos transgenes foi certificada por PCR. A ausência da proteína em meios de cultura foi confirmada através de western blotting, aplicando anticorpos monoclonais anti-b- cinamomina, e a ausência do respectivo RNAm foi comprovada com quantificação por RTPCR em tempo real, observando-se também uma diminuição na expressão de genes codificantes para outras elicitinas. Testes de patogenicidade realizados em Q. suber com o único co-transformante estável obtido (resistente ao antibiótico e com gene βcin silenciado), com um transformante simples (resistente ao antibiótico) e com os respectivos isolamentos selvagens revelaram uma diminuição de patogenicidade na estirpe com o gene βcin silenciado, que não pode ser atribuída à simples presença do gene de resistência. Perfis de expressão genética obtidos por cDNA-AFLP revelaram diferenças marcantes entre co-transformante e isolamento selvagem e a sequenciação de alguns fragmentos diferencialmente transcritos revelou que estes estão potencialmente associados à expressão do gene cinβ, destacando-se entre eles um gene associado ao metabolismo de ácidos gordos.
Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2006 Phytophthora cinnamomi, oomiceta parasita das raízes de Quercus suber, excreta abundantemente cinamominas, proteínas da família das elicitinas. Foi demonstrada a interacção destas proteínas com vários tipos de moléculas lipídicas mas desconhece-se o seu papel biológico. Neste trabalho foi induzido o silenciamento do gene codificante para a β-cinamomina, após transformação genética de protoplastos por meios químicos (lipossomas e CaCl2/PEG) com uma sequência anti-sentido do gene βcin. A selecção dos transformantes foi realizada através da co-transformação com um gene que conferiu resistência à higromicina B. A presença dos transgenes foi certificada por PCR. A ausência da proteína em meios de cultura foi confirmada através de western blotting, aplicando anticorpos monoclonais anti-b- cinamomina, e a ausência do respectivo RNAm foi comprovada com quantificação por RTPCR em tempo real, observando-se também uma diminuição na expressão de genes codificantes para outras elicitinas. Testes de patogenicidade realizados em Q. suber com o único co-transformante estável obtido (resistente ao antibiótico e com gene βcin silenciado), com um transformante simples (resistente ao antibiótico) e com os respectivos isolamentos selvagens revelaram uma diminuição de patogenicidade na estirpe com o gene βcin silenciado, que não pode ser atribuída à simples presença do gene de resistência. Perfis de expressão genética obtidos por cDNA-AFLP revelaram diferenças marcantes entre co-transformante e isolamento selvagem e a sequenciação de alguns fragmentos diferencialmente transcritos revelou que estes estão potencialmente associados à expressão do gene cinβ, destacando-se entre eles um gene associado ao metabolismo de ácidos gordos.
Document Type
Doctoral Thesis
Language Portuguese
Advisor(s) Cravador, A.
Language Portuguese
Advisor(s) Cravador, A.
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