Autor(es):
Silva, Raquel Sofia Nunes da 
Data: 2011
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10773/7598
Origem: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Assunto(s): Bioquímica; Glicosilação; Stresse oxidativo; Apoptose; Fosfolípidos; Imunidade
Descrição
As fosfatidilserinas são aminofosfolípidos que podem reagir com a glucose
formando fosfolípidos glicados. Pensa-se que estes derivados
glicados têm uma maior predisposição que a fosfatidilserina nativa de
sofrer modificações induzidas por stress oxidativo que, por promoverem
a peroxidação lipídica, podem desempenhar um papel relevante
em diversas situações patológicas associadas com a inflamação e a
resposta imune, assim como envelhecimento, doenças neurodegenerativas
e a diabetes. Por outro lado, estudos de fosfatidilserinas oxidadas
têm evidenciado poderem estar envolvidas no processo de eliminação
de células apoptóticas.
Com o intuito de estudar as modificações que ocorrem em condições
de stress oxidativo em fosfatidilserinas glicadas, começou-se
por oxidar, recorrendo a uma reacção de Fenton, as fosfatidilserinas
1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (DOPS), 1-palmitoil-2-oleoil-snglicero-
3-fosfo-L-serina (POPS) e 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-Lserina
(DPPS). Os produtos de oxidação foram caracterizados por espectrometria
de massa. Deste estudo foi possível identificar fosfatidilserinas
oxidadas não só nas cadeias de ácidos gordos mas também,
pela primeira vez, na serina da cabeça polar. Foram avaliadas as
propriedades pró-inflamatórias dos produtos de oxidação resultantes
de modificações ca cabeça polar por citometria de fluxo. Os resultados
obtidos permitiram identificar os derivados 1-palmitoil-2-oleoil-snglicero-
3-fosfohidroperoxiacetaldeído como importantes activadores da
expressão de citocinas em monócitos e células dendríticas mielóides.
Por fim, para avaliar o efeito de glicação, prepararam-se POPS glicadas,
as quais foram oxidadas utilizando as mesmas condições oxidativas
que para as PS oxidadas. Os produtos glicados e glicoxidados
foram analisados por ESI-MS, ESI-MS/MS, HPLC-MS e HPLC-MS/MS,
identificando-se produtos de oxidação de POPS glicoxidadas modificadas
na cadeia acil e na molécula de glucose. Phosphatidylserine is an aminophospholipid that can react with a molecule
of glucose leading to the formation of glycated phospholipids. It
is thought that these derivatives are more susceptible to suffer oxidation
than native phosphatidylserines. This glycated phospholipids can
be implied in several patological processes like inflamation, abnormal
imune response, aging, neurodegenetative diseases and diabetes.
In order to evaluate the modifications that can ocurre by oxidative stress
in glycated phosphatidylserines, in this work, we started by the study of
the oxidation of 1,2-phosphatidylserine dioleoil-sn-glycero-3-phospho-
L -serine (DOPS), 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine
(POPS) and 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine (DPPS) under
a Fenton reaction.The oxidation products were characterized by
mass spectrometry. In this study it was possible to identify not only
phosphatidylserine oxidized on the fatty acil chains but also oxidation
on the serine, on the polar head, for the first time.
The imune activity of the oxidation products resulting from changes on
the polar head of POPS and DPPS were studied by flow cytometry. The
results obtained with this study allowed the identification of the derivatives
1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphohidroperoxyacetaldeide
(POPS -13 Da) as important activators of cytokine expression by monocytes
and myeloid dendritic cells.
Finally, glycated phosphatidylserine were synthesized and glycosilated
phosphatidylserine were studied, by ESI-MS, ESI-MS/MS, HPLC-MS
and HPLC-MS/MS, and were identified modifications on the phospholipid
acil chain and on the glucose moiety in glycoxilated POPS. Mestrado em Bioquimica
Tipo de Documento
Dissertação de Mestrado
Idioma
Português
Orientador(es)
Domingues, Maria do Rosário; Domingues, Pedro
