Author(s):
Carvalho, Catarina Isabel Cruz de 
Date: 2008
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10400.5/847
Origin: Repositório da UTL
Subject(s): Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC; Adherence; Adhesins; Proteins; Vaccines; Bovine lung epithelial cells; Aderência; Adesinas; Proteínas; Vacinas; Células epiteliais de pulmão de bovino
Description
Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A aderência de um agente patogénico às células do hospedeiro é um factor importante no
estabelecimento da infecção. Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC (MmmSC), agente
causal da peripneumonia contagiosa dos bovinos (PPCB), já foi detectado, por
imunohistoquímica, associado à superfície das células do epitélio pulmonar de bovinos com
lesões patognomónicas da doença. Também já foi demonstrado que este micoplasma tem
capacidade para aderir in vitro a células epiteliais de pulmão de bovino.
O objectivo principal deste trabalho foi estudar o envolvimento das proteínas de superfície da
membrana do micoplasma no processo de citoaderência. Células epiteliais de pulmão de
embrião bovino (EBL) foram infectadas com a estirpe B345/93 de MmmSC, previamente
submetida à acção de várias concentrações de proteinase K e tripsina. A citoaderência foi
revelada por imunofluorescência indirecta, sendo avaliada por citometria de fluxo e
microscopia de fluorescência. Verificou-se uma diminuição significativa da aderência dos
micoplasmas às células EBL. Pela determinação da concentração de proteína, da viabilidade e
da actividade metabólica dos micoplasmas, foi possível concluir que aquelas enzimas
actuaram sobre as proteínas de superfície da membrana dos micoplasmas.
A inibição da aderência não foi total, pressupondo-se que outras moléculas possam estar
associadas ao processo de citoaderência. No entanto, conclui-se que as proteínas são as
moléculas mais importantes na ligação dos micoplasmas às células epiteliais de pulmão de
bovino, sugerindo que o desenvolvimento de vacinas, baseadas essencialmente em adesinas
proteicas de MmmSC, poderá ser uma abordagem promissora na prevenção da PCB. ABSTRACT
The adherence of a pathogenic agent to its host cells is an important factor to the
establishment of infection. Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (MmmSC), the etiological
agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP), was already detected, by
immunohistochemistry, associated to the surface of lung epithelial cells from bovines with
pathognomonic lesions of the disease. It was also shown that this mycoplasma has ability to
adhere in vitro to bovine lung epithelial cells.
The main goal of the present work was to study the involvement of mycoplasma membrane
surface proteins in the cytoadherence process. Embryonic bovine lung (EBL) cells were
infected with the strain B345/93 previously treated with different concentrations of proteinase
K and trypsin. Cytoadherence was revealed by indirect immunofluorescence, being evaluated
by flow cytometry and fluorescence microscopy. A significant decrease on the adherence of
mycoplasmas to EBL cells was verified. The determination of protein concentration, viability
and metabolic activity of mycoplasmas allowed to conclude that those enzymes have cleaved
mycoplasma membrane surface proteins.
Since total inhibition of mycoplasma adherence was not found, it is assumed that other
molecules may be involved in the cytoadherence process. It was concluded, however, that
proteins are the major molecules implied in the attachment of MmmSC to bovine lung
epithelial cells, suggesting that the development of vaccines, essentially based on
proteinaceous adhesins, could be a promising approach in the prevention of CBPP.
Document Type
Bachelor Thesis
Language
Portuguese
Advisor(s)
Correia, Ivone Carla Costa Borges; Veloso, Maria Gabriela Lopes
