Autor(es):
Santos, Cátia Raquel Talhas 
Data: 2009
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10773/8919
Origem: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Assunto(s): Microbiologia molecular; Bactérias; Resistência a antibióticos; Microorganismos patogénicos; Infecções hospitalares
Descrição
Actualmente, é cada vez mais frequente a associação de bactérias
oportunistas e comensais resistentes a antibióticos com infecções
nosocomiais. Este problema clínico tornou-se preocupante e deve-se
ao uso indiscriminado de antibióticos. Perante esta pressão selectiva,
as bactérias desenvolvem diferentes mecanismos de resistência a estes
compostos. A presença de estruturas capazes de transportar genes de
resistência, designadas por integrões, que contribuem para a
disseminação destes genes bem como a sua associação com o perfil de
resistência de bactérias constitui o objectivo do presente trabalho.
Assim, foram recolhidas amostras de superfícies das instalações
sanitárias, do serviço de Medicina II, do Hospital Infante D. Pedro,
Aveiro. Após o isolamento das bactérias em meio selectivo para Gramnegativas
(MacKonkey), todos os isolados foram sujeitos a tipagem
molecular por BOX-PCR. O perfil de bandas obtido após electroforese
foi analisado com o programa GelCompar II software (Applied Maths,
Kortrijk, Belgium), permitindo distinguir diferentes grupos clonais. De
cada grupo clonal foi seleccionado um isolado para os estudos
posteriores, resultando num total de 45 isolados distintos.
A pesquisa de integrões classe 1 iniciou-se por um “screening” para o
gene da integrase. Nos 25 isolados positivos para este gene, foi
amplificada e caracterizada a respectiva região variável. A sequência
nucleotídica dos amplicões foi comparada com outras depositadas na
base de dados.
Os resultados mostraram a presença de integrões em diferentes
espécies (Pseudomonas putida, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,
Pseudomonas mendocina, Proteus mirabillis e Morganella morganii).
As regiões variáveis apresentavam diferentes tamanhos e diferentes
arranjos de genes. Em geral, predominam gene cassettes que
conferem resistência aos aminoglicosídeos, trimetoprime e metalo-β-
lactamases. A localização destas estruturas no genoma bacteriano foi
efectuada por “southern blot”; o DNA genómico foi digerido com a
enzima S1, e sujeito a hibridação com sondas para os genes 16S e da
integrase revelando que a maioria dos integrões estão localizados em
plasmídeos.
Como conclusão geral, verifica-se a prevalência de isolados contendo
determinantes genéticos de resistência em superfícies inanimadas do
ambiente hospitalar (53.33%), os quais podem constituir um potencial
risco para os pacientes, uma vez que se trata de bactérias oportunistas.
O facto de estes genes de resistência estarem associados a elementos
genéticos móveis, nomeadamente transposões e muitas vezes
plasmídeos, facilita a sua disseminação no ambiente hospitalar,
principalmente por transferência horizontal de genes. Currently, it is becoming frequent the association of antibiotic
resistant opportunistic and commensal bacteria with nosocomial
infections. This is a clinical problem of concern and is based on the
indiscriminate use of antibiotics. Given the selective pressure within
the hospital environment, bacteria develop different resistance
mechanisms to these compounds. The presence of structures,
referred as integrons, that carry and disseminate these resistance
genes among bacteria and their association with the bacteria
resistance profile constitutes the aim of the present study.
To this end we collected samples from surfaces of sanitary facilities,
of the Medicine II service of the Hospital Infante D. Pedro, Aveiro.
After bacteria isolation on a selective medium (MacKonkey) for
Gram negatives, all the isolates were molecular typed by BOX-PCR.
After electrophoresis, the banding pattern was analysed with the
GelCompar II software (Applied Maths, Kortrijk, Belgium), which
allowed for the selection of different clonal groups. One isolate was
selected from each group for further studies.
Forty five isolates were selected for the screening of class 1
integrons. In the twenty-five positive isolates respective variable
region was amplified and characterized. Amplicons nucleotide
sequences were compared with others deposited in databases.
The results revealed the presence of integrons in different species
(Pseudomonas putida, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,
Pseudomonas mendocina, Proteus mirabillis e Morganella
morganii). Different lenghts of variable regions and different genes
arrays were found. Generally gene cassettes conferring resistance to
aminoglycosides trimethoprim and metallo-β-lactamases were
predominante. Southern hybridization of S1 digested genomic DNA
with 16 rDNA and integrase genes labeled probes revealed that the
majority of the integrons are located in plasmids.
To conclude, is important to refer that there is a prevalence of
opportunistic bacteria possessing integrons in inanimate surfaces
within the hospital environment, which can constitute risk to the
debilitated patients. Moreover, these structures are associated with
mobile genetic elements, mainly transposons and many times
plasmids, which facilitates the dissemination of these antibiotic
resistance genes in the hospital environment, mainly by horizontal
gene transfer. Mestrado em Microbiologia Molecular
