Autor(es):
Ferreira, Célia Sofia Ramalho 
Data: 2009
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10773/8757
Origem: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Assunto(s): Biologia molecular; Hepatite; Doenças infecciosas
Descrição
A infecção pelo vírus da hepatite B (VHB) constitui um grave problema para a
saúde pública, calculando-se que mais de 2 biliões de pessoas foram
infectadas e mais de 350 milhões de pessoas no mundo sejam doentes
crónicos infectados pelo VHB, dos quais 20 a 30 % estão em risco de morrer
de carcinoma hepatocelular ou de outros problemas hepáticos.
A variabilidade genética do VHB reflecte-se nos diferentes genótipos, sendo
conhecidos actualmente 8 genótipos diferentes denominados pelas letras de A
a H.
O conhecimento do significado clínico dos diferentes genótipos em doentes
com ambas as infecções do VHB (aguda e crónica) foi aumentando ao longo
dos anos.
A introdução de técnicas baseadas em biologia molecular deu-nos uma
ferramenta preciosa no manejo de hepatites virais, uma vez que podem ser
usadas para confirmar o diagnóstico de infecção activa. Estas técnicas ajudam
ainda a estabelecer um prognóstico, a seleccionar e ajustar protocolos de
tratamento e avaliam a resposta viral à terapêutica, incluindo o
desenvolvimento de resistências.
O DNA do VHB pode ser detectado e quantificado através de tecnologias de
amplificação de ácidos nucleicos como é o caso da Reacção em Cadeia da
Polimerase em tempo real (PCR-RT). Esta técnica é bastante recomendada
para a monitorização da hepatite B, pela sua sensibilidade, precisão e limites
dinâmicos máximos, quando comparada com outros testes comerciais.
O teste Cobas® AmpliPrep/Cobas® TaqMan® HBV (Roche Diagnostics) é um
teste comercial de amplificação de ácidos nucleicos para a determinação da
virémia baseado na química do PCR TaqMan. Este teste foi recentemente
desenvolvido para poder ser usado com o protocolo do Cobas AmpliPrep
(equipamento automático de extracção de DNAs ou RNAs de produtos
biológicos, tal como soro e plasma).
Uma vez que o teste Cobas® AmpliPrep/Cobas® TaqMan® HBV foi validado
apenas para utilização de plasma humano colhido com EDTA, pretende-se
com este estudo comparar a carga viral do DNA do VHB, por PCR-RT em
amostras de plasma e soro. Esta comparação permitirá a validação interna dos
resultados em amostras de soro. Para esta validação usaram-se amostras de
360 indivíduos com infecção pelo VHB aguda ou crónica, activa ou não. Os
resultados obtidos mostram que existe uma boa correlação entre as cargas
virais do plasma e as cargas virais do soro, sendo uma relação
estatisticamente significativa entre as duas variáveis (p <0,05), pelo que se
pode validar o uso do teste Cobas® AmpliPrep/Cobas® TaqMan® HBV em
soro. Conclui-se assim que o teste foi validado para amostras de soro. Hepatitis B virus (HBV) infection is a serious public health problem. Estimations
indicate that more than 2 billion people had been infected and more than 350
million people in the world are chronically infected with HBV, 20 to 30% which
are at risk of dying of hepatocelular carcinoma or other hepatic related
problems.
The HBV genetic variability is reflected on different genotypes, being currently
known 8 different genotypes named by the letters A- H. The knowledge of
clinical meaning of different genotypes in sick people with both the infections of
the HBV (acute and chronic) was increasing throughout the years.
The employment of techniques based on molecular biology gave us a precious
tool to handling viral hepatitis. They can be used to diagnosis active infection,
help to establish a prognostic, to select and to adjust treatment protocols and
evaluate the viral response to therapeutic, including resistances development.
HBV DNA can be detected and quantified through nucleic acids amplification
technologies such real-time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Follow-up
using RT-PCR is strongly recommended because of its sensitivity, accuracy
and broad dynamic range, compared to those of the existing commercial
assays.
The Cobas® TaqMan® HBV test (Roche Diagnostics) is a commercial nucleic
acid amplification test for HBV DNA viral load determination based on TaqMan
PCR chemistry and recently it had been combined with an automatic DNA or
RNA extraction on the Cobas® AmpliPrep, a new instrument designed for rapid
high-throughput purification of DNAs and RNAs from biologic products (such
serum and plasma.
Because Cobas® AmpliPrep/Cobas® TaqMan® HBV test was validated only
for human plasma collected in EDTA, the aim of this study is to compare the
PCR-RT viral load of HBV DNA in samples of plasma and serum, with the
purpose of internal validation results on serum samples.
This comparison will allow internal validation of results on serum samples. For
this validation we used samples of 360 patients with acute or chronic HBV
infection, active or not. The results show that there is a good correlation
between the plasma viral loads and serum viral loads, being a statistically
significant relationship between the two variables (p < 0.05), can validate using
Cobas® AmpliPrep/Cobas® TaqMan® HBV test in serum. In conclusion, the
test was validated on serum samples. Mestrado em Biologia Molecular e Celular
Tipo de Documento
Dissertação de Mestrado
Idioma
Português
Orientador(es)
Sargento, Maria Celene da Silva Sousa; Santos, Conceição
