Author(s):
Ribeiro, Miguel Costa 
Date: 2011
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10773/7229
Origin: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Subject(s): Bioquímica; Proteómica; Glândulas mamárias; Diferenciação celular; Estrogénios; Apoptose
Description
A sinalização paracrina e autocrina desempenha um papel importante
na proliferação, diferenciação e apoptose das células epiteliais
mamárias. Apesar de este facto ser globalmente aceite os
mecanismos pelos quais estes processos ocorrem ainda não são
totalmente compreendidos. Em particular, a acção dos estrogénios
através do receptor de estrogénio alpha (ERα) e beta (ERβ) afectam
profundamente a proliferação e diferenciação; no entanto o papel do
ERβ nestes processos é ainda pouco conhecido.
Com o objectivo de melhor compreender os mecanismos de
sinalização envolvidos na diferenciação das células epiteliais
mamárias fez-se a recolha do meio condicionado (CM) de células
HC11 nas 3 etapas de diferenciação: stem-cell like (SCL), predifferenciadas
(PD) e funcionalmente diferenciadas (D). Em seguida,
as proteínas do CM foram separadas com recurso a SDS-PAGE e
2D-PAGE e identificadas por MALDI-TOF/TOF. Os nossos resultados
mostram que células em SCL segregam factores que possuem um
papel pró-angiogenico/invasor e de sobrevivência, bem como outros
factores que desempenham a função oposta. Estes resultados estão
de acordo com o estado activo de proliferação e migração observado
nestas células. Com o inicio da diferenciação (células em PD e D)
ocorreu uma mudança nas proteínas mais secretadas, sendo
possível observar um aumento do nível de proteínas que regulam a
adesão e apoptose.
Para estudar os mecanismos regulados pelo ERβ, o CM de células
não diferenciadas, bem como de células a entrar em diferenciação (-
EGF) e totalmente diferenciadas (D) foi recolhido após a activação do
ERβ por ligandos. As proteínas presentes no CM foram novamente
separadas por SDS-PAGE e 2D-PAGE e identificadas por MALDITOF/
TOF. Os nossos resultados mostraram uma diferença nos níveis
de proteínas segregadas em SCL+EGF quando comparado com
SCL-EGF, indicando que as vias metabóicas que mantêm as células
numa condição indiferenciada como o EGF também comunicam com
a sinalização activada por ERβ. Além disso, em concordância com
SCL-EGF, as células em D, as proteínas reguladas pelo ERβ
estavam relacionadas com adesão e apoptose indicando que o
estado celular de diferenciação modula a sinalização do ERβ; sendo
que o já identificado papel de supressor tumoral do ERβ é
desencadeado apenas quando as células começam a diferenciar. Paracrine and autocrine signalling play an important role in proliferation,
differentiation and apoptosis of mammary epithelial cells. Despite this fact
being accepted unanimously, the mechanisms by which these processes occur
are not fully understood. In particular, estrogens acting through estrogen
receptors alpha (ERα) and beta (ERβ) profoundly affect proliferation and
differentiation; however, knowledge about ERβ role in these processes is still
unclear.
With the goal to best understand the signalling mechanisms involved in
mammary epithelial cells differentiation, we collected the conditioned media
(CM) of HC11 cells in the three stages of differentiation: stem-cell like (SCL),
pre-differentiated (PD) and functionally differentiated (D). Next, the proteins in
the CM were separated using SDS-PAGE and 2D-PAGE and identified by
MALDI-TOF/TOF. Our results showed that SCL cells secrete factors with proangiogenic/
invasion and survival roles as well as factors with the opposite
functions. These results were in agreement with the controlled active
proliferation and migration observed in these cells. With the beginning of
differentiation (PD and D cells) a change in the most secreted proteins
occurred, being possible to observe a raise in the levels of proteins that
regulate adhesion and apoptosis.
To study the mechanisms regulated by ERβ, the CM of SCL cells either kept
undifferentiated (+EGF), entering differentiation (-EGF) or fully differentiated (D)
was collected following ERβ ligand activation. Proteins present in the CM were
once again separated by SDS-PAGE and 2D-PAGE and identified by MALDITOF/
TOF. Our results showed a difference in the levels of proteins secreted in
SCL+EGF compared to SCL-EGF, indicating that pathways that maintain the
undifferentiated SCL stage such as EGF also cross talk with ERβ signalling.
Moreover, similar to SCL-EGF, in D cells, proteins regulated by ERβ were cell
adhesion and apoptosis related proteins indicating that the cellular state of
differentiation modulates ERβ signalling; being that the previously identified
tumour suppressor role of ERβ is triggered only with the beginning of
differentiation. Mestrado em Bioquímica
