Autor(es):
Pena, Aldina Maria Rodrigues 
Data: 2006
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10773/714
Origem: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Assunto(s): Microbiologia molecular; Microorganismos patogénicos; Antibióticos
Descrição
Pseudomonas aeruginosa é um patogénico humano oportunista responsável
por infecções nosocomiais, particularmente em doentes imunocomprometidos.
Os carbapenemos são agentes antimicrobianos frequentemente utilizados no
tratamento de infecções provocadas por P. aeruginosa. Contudo, nesta
espécie, tem-se verificado um aumento de estirpes resistentes a estes
antibióticos. A produção de metalo-β-lactamases constitui um dos mecanismos
de resistência emergente aos carbapenemos. As metalo-β-lactamases
caracterizam-se pela eficiente capacidade de hidrolisar a maioria dos
β-lactâmicos, especialmente os carbapenemos. A observação de isolados
produtores das metalo-β-lactamases IMP e VIM tem aumentado por todo o
mundo. A metalo-β-lactamase VIM é a mais frequente na Europa
mediterrânica. Recentemente em P. aeruginosa foram descritas as metalo-β-
lactamases SPM-1 no Brasil e GIM na Alemanha. Neste trabalho foram
estudados 136 isolados clínicos resistentes ao imipenemo seleccionados a
partir de 773 isolados de P. aeruginosa, colhidos durante dois anos (Abril de
2003 e Abril de 2005) no Centro Hospitalar de Coimbra. As susceptibilidades
destes isolados resistentes ao imipenemo a outros antibióticos foram:
meropenemo 20,3%, ceftazidima 56,7%, cefepima 49,6%,
piperacilina/tazobactam 47,4%, aztreonamo 37,3%, amicacina 73,1% e
ciprofloxacina 53,0%. O teste de sinergismo do duplo disco foi usado para
triagem dos isolados clínicos resistentes ao imipenemo relativamente à
presença de metalo-β-lactamases, observando-se que 40 (29,4%) isolados
apresentaram teste fenotípico positivo. O gene blaVIM foi detectado em 26
isolados (19,1%). As metalo-β-lactamases IMP, SPM e GIM não foram
detectadas. Por sequenciação verificou-se a presença de VIM-2 nestes 26
isolados. As CMIs dos isolados que apresentaram VIM-2 foram determinadas e
os resultados revelaram que a piperacilina foi o antimicrobiano mais eficaz
(84,6%) seguido do aztreonamo (76,9%), ceftazidima (53,8%) e meropenemo
(20,3%). O gene blaVIM-2 é encontrado com uma certa frequência em cassetes
genéticas inseridas em integrões de classe 1. Em três isolados blaVIM-2
positivos foram detectados estes integrões, verificando-se que o gene blaVIM-2
estava inserido nesses integrões de classe 1 conferindo-lhes potencial de
disseminação. A tipagem por RAPD dos isolados blaVIM-2 positivos demonstrou
7 tipos de perfis (A a G), com predominância do perfil A que se encontrava
disseminado por 5 Unidades Hospitalares, nomeadamente Medicina,
Reanimação, Pneumologia, Neurocirurgia e Ortotraumatologia.
ABSTRACT: Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic human pathogen and a leading
cause of nosocomial infections, particularly in immunocompromised patients.
Carbapenems are important therapeutic agents for the treatment of infection
with multidrug-resistant Gram negative bacteria, such as P. aeruginosa. The
production of metallo-β-lactamases is one of the emerging mechanisms of
carbapenem resistance in P. aeruginosa. The metallo-β-lactamases confer
efficient hydrolysis of almost all of β-lactam, especially carbapenems. Clinical
isolates harbouring the metallo-β-lactamases IMP and VIM have been
increasingly reported worldwide, and VIM has been reported especially in
Mediterranean Europe. Recently, in P. aeruginosa another two metallo-β-
lactamases have been described: SPM-1 in Brazil and GIM in Germany. For
this work, 773 clinical isolates of P. aeruginosa were collected in Centro
Hospitalar of Coimbra, during two years (April 2003 to April 2005). From these,
136 (17.6%) isolates were selected because they were resistant to imipenem.
The susceptibilities to others antibiotics of imipenem resistant isolates were:
meropenem 20.3%, ceftazidime 56.7%, cefepime 49.6%, piperacillin plus
tazobactam 47.4%, aztreonam 37.3%, amikacin 73.1% and ciprofloxacin
53.0%. Clinical isolates of P. aeruginosa imipenem resistant were initially
screened for the presence of metallo-β-lactamases by a double-disk synergy
test. Forty (29.4%) isolates had positive phenotypic screening tests. Twenty-six
isolates (19.1%) demonstrated the presence of blaVIM. The others metallo-β-
lactamases tested were negative. Sequencing demonstrated the presence of
VIM-2 enzyme in these 26 isolates.
Among these strains that harboured VIM-2, MICs were determined and the
results revealed that piperacillin inhibited 84.6% followed by aztreonam 76.9%,
ceftazidime 53.8% and meropenem 20.3%.The blaVIM-2 gene is usually in a
gene cassette integrated in class 1 integrons. In the isolates blaVIM-2 positives
the class 1 integrons were detected in three isolates. In these isolates blaVIM-2
gene were inserted in class 1 integrons with the potencial to spread.
RAPD typing of the isolates blaVIM-2 positives demonstrated seven distinct
amplification patterns (A to G), with predominance of pattern A, that was
disseminated in 5 wards, namely Medicine, Reanimation, Pneumonology,
Neurosurgery and Orthotraumatology. Mestrado em Microbiologia Molecular
