Autor(es):
Ferreira, Ana Sofia Costa 
Data: 2010
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10773/3155
Origem: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Assunto(s): Métodos biomoleculares; Patologia celular; Proteomas; Histonas; Cancro da próstata
Descrição
No sentido de contribuir para uma melhor compreensão dos fenómenos
moleculares subjacentes ao cancro da próstata e do efeito de um
inibidor de DNAmetiltransferases com potencial acção terapêutica, neste
estudo efectuou-se a análise do proteoma nuclear e a identificação de
PTMs em histonas usando a linha celular LNCaP. Assim, as células
LNCaP foram tratadas com diferentes concentrações de 5-aza-2’-
desoxicitidina (DAC). As proteínas presentes no núcleo foram
identificadas por 2D-PAGE-MS/MS, e as histonas foram analisadas por
LC-MS/MS com o intuito de (i) estabelecer o perfil proteico do núcleo
das células LNCaP, (ii) comparar, qualitativa e quantitativamente o
proteoma nuclear das células LNCaP não tratadas e tratadas com
diferentes concentrações de DAC (1mM e 5mM); (iii) identificar as PTMs
(metilações e acetilações) nas várias classes de histonas; e (iv) avaliar o
efeito de diferentes concentrações de DAC (0mM, 1mM e 5mM) no perfil
de PTMs das histonas. Os resultados sugerem que o DAC induz a
alteração da expressão de proteínas relacionadas com a transcrição e
tradução e, em particular, a administração de 1mM de DAC induz o
aumento da expressão de proteínas associadas à apoptose. A análise
de PTMs evidenciou a predominância da modificação K96m2 na histona
H2A, e a administração de 1DAC induz um aumento do número de
modificações, particularmente na classe de histonas H1, com
predominância da metilação, tanto na cauda como na componente
globular das histonas. O aumento de PTMs em histonas de células
tratadas com 1DAC parece estar relacionado com a alteração da
expressão de algumas proteínas envolvidas nos processos de
transcrição e tradução.
ABSTRACT: In order to contribute to a better comprehension of the molecular
mechanisms underlying prostate cancer and the effect of the inhibitor
DNAmetiltransferases with potential therapeutic role, in this study we
analysed the nuclear proteomics and identified PTMs on histones using
the cell line LNCaP. Thus, LNCaP cells were treated with different
concentrations of 5-aza-2'-deoxycytidine (DAC). The proteins present in
the nucleus were identified by 2D-PAGE-MS/MS, and histones were
analyzed by LC-MS/MS with the aim of (i) establish the nuclear protein
profile of LNCaP cells, (ii) compare qualitative and quantitatively the
nuclear proteome of LNCaP cells untreated and treated with different
concentrations of DAC (1mM and 5mM), (iii) identify the PTMs
(acetylations and methylations) in the various classes of histones, and
(iv) evaluate the effect of different concentrations DAC (0mM, 1mM and
5mM) in the profile of PTMs on histones. The results suggest that DAC
induces changes in the expression of proteins related with transcription
and translation and, in particular, the administration of 1mM DAC
induces the up-regulation of proteins associated with apoptosis. The
analysis of PTMs showed the predominance of K96m2 in the histone
H2A, and administration of 1DAC induces an increase in the number of
modifications, particularly in the class of histone H1, with a
predominance of methylation in both the tail and the globular component
of the histones. The increase of PTMs on histones in cells treated with
1DAC seems to be related with changes in the expression of proteins
involved in transcription and translation. Mestrado em Métodos Biomoleculares
Tipo de Documento
Dissertação de Mestrado
Idioma
Português
Orientador(es)
Amado, Francisco; Ferreira, Rita Maria Pinho
