Author(s):
Aroso, Miguel Ângelo Mouta Martins 
Date: 2007
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10773/2995
Origin: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Subject(s): Métodos biomoleculares; Proteómica; Glândulas lacrimais; Electroforese de proteínas; Drogas sintéticas
Description
As lágrimas são de grande importância na saúde ocular, cite-se como
exemplo o síndrome do olho seco (DES), que afecta milhões de pessoas todos
os anos. A glândula lacrimal, principal responsável pela constituição das
lágrimas, modula a sua secreção de acordo com estimulação parassimpática e
simpática, sendo, por isso, afectada por medicação tópica ou sistémica. Assim,
nos últimos anos tem havido um interesse crescente no estudo da composição
proteica do fluido lacrimal e da relação dessa composição com diferentes
estímulos da glândula lacrimal. A Ecstasy (3,4-metilenodioximetanfetamina,
MDMA) é a terceira droga ilegal mais utilizada, depois da cannabis e
anfetamina e é um composto simpaticomimético de acção indirecta, afectando
a secreção glandular. O objectivo deste trabalho foi avaliar o efeito, ao tempo
de uma e 24 horas, da MDMA na expressão proteica da glândula lacrimal após
administração aguda em rato e determinar a distribuição da MDMA em
diferentes tecidos de rato.
A MDMA foi quantificada, após hidrólise ácida e extracção em fase
sólida das amostras, por espectrometria de massa (Triplo-Quadrupolo). Ao
tempo de 1 hora, concentração de MDMA na glândula lacrimal é bastante
elevada relativamente aos restantes tecidos. Para a análise da expressão
proteica da glândula lacrimal e de forma a reduzir a complexidade do proteoma
glandular efectuou-se o fraccionamento subcelular desta glândula, obtendo-se
a fracção enriquecida do citoplasma. Esta fracção foi separada por 2DE e as
proteínas identificadas por espectrometria de massa (MALDI/TOF/TOF). A
comparação de géis 2DE, analise esta realiza com o software PDQuest,
permitiu observar uma variação da abundância relativa, após administração de
MDMA, de proteínas relacionadas com a defesa antioxidante, o metabolismo
celular, a actividade proteolítica e a síntese proteica. A análise por microscopia
electrónica de transmissão (TEM) revelou que ao tempo de 1 hora a MDMA
provoca desgranulação das células acinares e alteração de várias estruturas
celulares e da membrana citoplasmática, indicativo de stresse celular. Às 24
horas há apenas indícios de recuperação celular.
ABSTRACT: Tears are of most importance in ocular health, as an example it can be
considered the dry eye syndrome (DES) that affects millions of patients every
year. The lachrymal gland, the main contributor for the constitution of tears,
modulates the secretion accordingly with the parasympathetic and/or
sympathetic stimulation. Therefore, it’s affected by topic or systemic
medication. In the last years, there has been an increased interest in studying
the protein composition of tear fluids as well as the relationship between protein
composition and physiological variations. Ecstasy (3,4-
methylenedioxymethamphetamine, MDMA) is the third illegal drug more
abused after cannabis and amphetamine and is an indirectly acting
sympathomimetic, stimulating in this way the glandular secretion. The goal of
this work was to evaluate the action, at time 1 hour and 24 hours, of the MDMA
in the lachrymal gland protein expression after acute administration in mouse
and evaluate the distribution of the MDMA in different organs of mouse.
MDMA was quantified, after acidic hydrolysis and solid phase extraction
of the different samples, with mass spectrometry (Triple-Quadrupole). At the
time of 1 hour the concentration determined in the lachrymal gland is high when
compared with other organs. For the proteomic analysis, in order to reduce the
complexity of the glandular proteome, it was obtained a subcelular fraction rich
in cytoplasm. This fraction was separated by 2DE and the proteins were
identified by mass spectrometry (MALDI/TOF/TOF). By comparing 2D gels
from different samples using the software PDQuest, it was observed that the
proteins related with antioxidant activity, metabolism, proteolitic activity and
protein synthesis, had a variation of the relative abundance when compared
with the control, after the administration of MDMA. The analysis of the
lachrymal gland by transmission electron microscopy (TEM) showed that
MDMA, at the time of 1 hour, stimulates the degranulation of the acinar cells
and induces structural alterations of various organelles and the cytoplasmic
membrane. This is indicative of strong cellular stress. At time of 24 hours after
administration of MDMA it was observed some recuperation of the acinar cells. Mestrado em Métodos Biomoleculares Avançados
