Author(s):
Caseiro, Armando José Cerejo 
Date: 2007
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10773/2959
Origin: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Subject(s): Métodos biomoleculares; Glândulas salivares; Proteómica; Electroforese de proteínas
Description
A saliva é uma mistura complexa de proteínas, glicoproteínas, enzimas,
hormonas, minerais e desempenha funções fisiológicas importantes. A maior
produção de proteínas da saliva ocorre nas glândulas salivares, parótida,
submandibular e sublingual e outras pequenas glândulas da mucosa oral.
Apesar das glândulas salivares apresentarem fulcral importância para
compreensão de determinadas patologias orais, o conhecimento da sua
expressão proteica é ainda reduzido. Assim, o objectivo principal deste trabalho
caracterização do proteoma das glândulas salivares, usando o ratinho como
modelo animal.
A caracterização do proteoma glandular envolveu o fraccionamento
subcelular das glândulas parótida e submandibular, obtendo-se para cada uma
delas, as fracções nuclear, citoplasmática e a correspondente aos grânulos
secretores. Complementarmente foram isoladas células acinares das glândulas,
procedendo-se ao seu fracionamento com obtenção da fracção citoplasmática.
análise das diferentes fracções efectuou-se utilizando electroforese
bidimensional e cromatografia líquida de alta resolução para a separação
proteínas e péptidos e a digestão tríptica para posterior identificação por
espectrometria de massa.
Após a análise comparativa dos mapas 2DE das glândulas parótida
submandibular observaram-se perfis característicos distintos. Dos mapas 2DE
obtidos para as diferentes fracções de parótida e submandibular foram
identificadas, respectivamente, um total de 125 e 100 proteínas, sendo 33 das
quais comuns. Da análise dos digestos trípticos dos grânulos indentificaram-
parótida 52 péptidos pertencentes a 17 proteínas e na submandibular 255
péptidos pertencentes a 19 proteínas.
As diferentes proteínas identificadas pertenciam as diversas classes
funcionais, destacando-se a classe proteolítica. Ambas as glândulas
apresentaram uma grande variedade de calicreínas, principalmente a glândula
submandibular onde se identificaram 15 membros desta família.
Este trabalho apresenta uma abordagem generalista da composição
proteica das diferentes fracções das glândulas salivares de ratinho, facilitando
desenvolvimento futuro de investigações mais específicas e/ou relacionadas com
uma patologia específica.
ABSTRACT: Saliva is a complex mixture of proteins, glycoproteins, enzymes and
hormones that play important physiological functions. The main protein sources
of saliva are the salivary glands; parotid, submandibular, sublingual and
numerous small glands distributed on the oral mucosa.
The knowledge of salivary glands protein expression is scarce and
important for the understanding of some oral pathologies. The aim of this work
is the characterization of the mouse salivary glands proteome, using the mouse
as the animal model.
For the glandular proteome characterisation subcelular fractionation of
the parotid and submandibular glands was performed, getting for each gland
the nuclear, cytoplasmic and secretory granules fractions. Complementarily,
glandular acinar cells were isolated and fractionated and the cytoplasmic
fraction characterised. The analysis of the different fractions were performed by
the separation of proteins and peptides by two-dimension gel electrophoresis
(2DE) and high resolution liquid chromatography (HPLC-MS) and tryptic
digestion used to further mass spectrometry identification.
After the comparative analysis of mouse parotid and submandibular
2DE maps, we observed distinct profiles. From the 2DE maps obtained to the
different fractions of parotid and submandibular were respectively identified a
total of 125 and 100 proteins, being 33 of them commons. From the HPLC-MS
data were identified 52 peptides belonging to 17 proteins in parotid and 255
peptides that belong to 19 proteins in submandibular gland.
The different proteins identified belong to several functional classes,
namely the proteolytic ones. In the submandibular gland about 32% of the
identified proteins were from kallikreins family. The salivary glands express a
great variety of kallikreins, mainly the submandibular gland in which was
identified 15 proteins of this family.
This work is a general approach to the protein composition of the
different mouse salivary glands fractions, contributing to future research with
clinical applications. Mestrado em Métodos Biomoleculares Avançados
