Author(s):
Correia, Mariana Isabel Gonçalves 
Date: 2012
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10773/10886
Origin: RIA - Repositório Institucional da Universidade de Aveiro
Subject(s): Biomedicina; Enzimas; Tumores; Genética molecular; Genética bioquímica
Description
Nicotinamida Adenina Dinucleótido (NAD) é um importante cofator nas
reações metabólicas, sendo um substrato para as enzimas consumidoras de
NAD, como as PARPs e as Sirtuinas. A via de síntese do NAD processa-se
pela via de novo, na qual o NAD é sintetizado através do triptofano e do
aspartato, e a via de reciclagem, onde o NAD pode ser reciclado a partir de
diferentes precursores. As células cancerígenas têm necessidades
aumentadas de NAD, pelo que inibidores da nicotinamida
fosforibosiltransferase (NAMPT), a enzima mais importante na via de
reciclagem do NAD nos humanos, estão em testes clínicos como agentes
terapêuticos para o cancro. Contudo, apesar de serem agentes promissores,
apresentam alguma citotoxicidade que pode ser ultrapassada pela adição de
ácido nicotínico (NA) que vai ativar o ácido nicotínico fosforibosiltransferase
(NAPRT) como via alternativa de síntese do NAD. Contudo, existe pouca
informação acerca dos padrões de expressão do NAPRT, apesar de que é um
biomarcador para a utilização do ácido nicotínico no tratamento com inibidores
do NAMPT.
Assim, o grande objetivo deste trabalho é caracterizar as duas
enzimas mais importantes da via de reciclagem do NAD, NAMPT e NAPRT,
em linhas celulares tumorais humanas, integrando informação obtida através
do ADN, ARN e proteína. Foram pesquisadas mutações e diferenças de
expressão, sendo também feita a análise da estrutura 3D da proteína NAMPTlike,
destacando três substituições de aminoácidos. Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD) is a major cofactor in
metabolic reactions, and is also the substrate of NAD-consuming enzymes
such as PARPs and Sirtuins. NAD biosynthesis occurs via the de novo
pathways, in which NAD is synthesized from tryptophan or aspartate, and the
salvage pathways, where NAD can be recycled from several different
precursors. Cancer cells have increased NAD requirements, thus inhibitors of
nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT), the main human NAD
salvage enzyme, are currently in clinical trials as novel cancer therapeutic
agents. The citotoxicity presented by these inhibitors can be decreased by the
use of nicotinic acid (NA) that will activate nicotinic acid
phosphoribosyltransferase (NAPRT) as an alternative NAD synthesis pathway.
Thus, the expression of NAPRT is a biomarker for the use of nicotinic acid as a
chemoprotector in treatment with NAMPT inhibitors, however, few studies have
addressed NAPRT expression in tumors.
So the main goal of this work was to characterize the two main
enzymes involved in the NAD salvage pathways, NAMPT and NAPRT, in
human tumor cell lines, by integrating data obtained from the three levels of
biological information – DNA, RNA and proteins. Mutations and differences in
expression levels were pursued and the analysis of the 3D structure of the
NAMPT-like protein was also a goal, highlighting the impact of three amino acid
substitutions. Mestrado em Biomedicina Molecular
