A atrofia tímica prematura induzida por Mycobacterium avium é causada por um au...

• Autor(es): Martins, Cláudia Maria Areias
• Data: 2012
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/1822/23538
• Origem: RepositóriUM - Universidade do Minho
• Tipo de Documento: Dissertação de Licenciatura
• Idioma: Português
• Orientador(es): Neves, Margarida Correia

Descrição

Dissertação de mestrado integrado em Engenharia Biomédica O timo é um órgão linfóide primário, local de diferenciação de linfócitos T que posteriormente são exportados para a periferia. Com o avançar da idade, o timo sofre um processo de involução fisiológica. No entanto, um estado de atrofia tímica prematura é descrito numa grande variedade de doenças infeciosas. Em ratinhos foi demonstrado que infeção por uma estirpe de elevada virulência de Mycobacterium avium (estirpe 25291) causa atrofia prematura deste órgão. O nível de atrofia tímica é muito importante para a recuperação de linfopenia, por exemplo em casos de pacientes com Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (SIDA) que se encontram a receber terapia antiretrovial ou em pacientes a recuperar de transplante de medula óssea. Assim, é essencial a identificação dos mecanismos causadores de atrofia tímica prematura de modo a evitar e/ou recuperar desta situação. A M. avium é um agente infecioso oportunista, responsável por infeção principalmente de indivíduos imunocomprometidos, como idosos e pacientes com SIDA. Estudos realizados revelaram uma variância na virulência de diferentes estirpes de M. avium: foi demonstrado que as estirpes 2447 e ATCC 25291 são virulentas e, após infeção sistémica, ambas infetam o timo. Contudo, uma atrofia tímica prematura apenas é observada em ratinhos após infeção sistémica com a estirpe 25291 de M. avium, que é uma estirpe de elevada virulenta. Um aumento de apoptose dos timócitos tem sido descrito em casos de atrofia tímica prematura durante infeções. Assim, considerando este facto, o objetivo deste projeto foi determinar se ocorre um aumento de apoptose dos timócitos em ratinhos infetados com a estirpe 25291 de M. avium comparativamente não só a ratinhos não infetados, mas também a ratinhos infetados com a estirpe de virulência intermédia 2447. Os ensaios de Imunofluorescência e Imunohistoquímica detetaram um aumento de caspase 3 ativa nos timos de ratinhos infetados com a estirpe mais virulenta de M. avium. No entanto não observamos evidência de caspase 3 ativa nos timos de ratinhos infetados com M. avium 25291 na análise por Western Blot. Não foram observadas alterações no rácio Bax/Bcl-2 nos timos de ratinhos infetados com a estirpe mais virulenta comparativamente com timos de ratinhos não infetados. Estes resultados sugerem que não há evidência da ocorrência de apoptose pela via mitocondrial na atrofia tímica prematura resultante de infeção por M. avium. Desta forma, os dados apresentados neste estudo não são conclusivos sobre a contribuição de um aumento de apoptose dos timócitos na atrofia tímica prematura induzida por M. avium. De modo a obter uma conclusão definitiva sobre esta questão é necessário proceder à realização otimização da técnica de western blot para deteção da presença de caspase 3 ativa nos timos atrofiados. The thymus is a primary lymphoid organ that is devoted to T lymphocyte differentiation and is, therefore, the source of new T lymphocytes that are exported to the periphery. During the normal life span, the thymus undergoes physiological involution with aging. However premature thymic atrophy has been described in the presence of a wide variety of infectious diseases. In mice it has been shown that infection with Mycobacterium avium 25291 leads to premature thymic atrophy. The level of thymic atrophy is very important for the recovery from lymphopenia for example in cases of AIDS patients receiving antiretroviral therapy or patients recovering from bone marrow transplantation. So it is very important to unveil the mechanism(s) associated to premature thymic atrophy in order to avoid and/or recover from this situation. M. avium is an opportunistic pathogen responsible for infection mostly in immunocompromised individuals like elderly and AIDS patients. Studies have revealed a variation in virulence on the different strains of M. avium: it has been shown that the strains 2447 and ATCC 25291 SmT are virulent, causing systemic infection and the thymus becomes infected by both of them. However, premature thymic atrophy is only observed in mice upon systemic infection with M. avium strain 25291, which is a highly virulent strain. Increased thymocyte apoptosis has been described in cases of premature thymic atrophy during experimental infection. Taking this into account, the aim of this project was to determine if there is increase of thymocyte apoptosis in mice infected with M. avium strain 25291 comparing not only to non-infected mice but also to mice infected with strain 2447. The immunofluorescence and immunehistochemistry assay detected an increase of active caspase 3 in thymus of mice infected with M. avium strain 25291. However there was no evidence of active caspase 3 by Western Blot analysis. There were no alterations on the ratio Bax/Bcl-2 in thymi from mice infected with the virulent strain comparing to non-infected mice. This result reveals that there is no evidence of mitochondrial-dependent apoptotic pathway on M. avium-induced premature thymic atrophy. So, the data presented in this study are not conclusive to address if M. aviuminduced premature thymic atrophy is caused by increased thymocyte apoptosis. In order to achieve a conclusion is important to quantify the activation of caspase 3 in thymus by optimization of western blot assay.