Autor(es):
Filipe, Marco António Ramos da Silva 
Data: 2013
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10348/2918
Origem: Repositório da UTAD
Assunto(s): Cancro; Bexiga; Citogenética; Cisplatina; Ensaio cometa; 5637; MCR; AgNOR; 575.22(043); 576.38(043)
Descrição
Mais de 90% dos tumores uroteliais surgem na bexiga, em que a forma mais
comum é o carcinoma de células transicionais da bexiga (TCC). Apesar da sua natureza
relativamente “benigna”, os TCCs superficiais possuem uma taxa de recaída até 70%
dos casos, 10 a 15% dos quais, progridem para a forma músculo-invasiva da doença. O
estudo in vitro com recurso a linhas celulares de cancro de bexiga apresenta-se assim
como um modelo clínico valioso para a compreensão da doença, bem como, a
investigação de fármacos antineoplásicos. Existem actualmente cerca de cinquenta
linhas celulares de cancro de bexiga disponíveis, das quais fazem parte as linhas 5637 e
MCR, respectivamente, de origem superficial e metastática.
A cisplatina (cis-diaminodicloroplatina(II)), um composto platinado de acção
alquilante, é um fármaco de ampla utilização no tratamento de diversos tipos de cancro,
como é o caso do cancro da bexiga. As lesões predominantes são as ligações cruzadas
do tipo intra-cadeia 1,2-d(GpG), que levam ao bloqueio da transcrição, replicação e
reparação do DNA.
O objectivo do presente trabalho centrou-se, numa primeira fase, na utilização de
várias técnicas de citogenética clássica e molecular no estudo das principais alterações
cromossómicas associadas às linhas celulares 5637 e MCR. E, numa segunda fase, na
avaliação do efeito da cisplatina sobre estas mesmas linhas ao nível das lesões no DNA
e da actividade proliferativa, integrando a citogenética, o ensaio do cometa e a
quantificação morfométrica das proteínas AgNOR.
Foi possível identificar várias alterações cromossómicas, em ambas as linhas
celulares, que foram descritas pela primeira vez, assim como, esclarecer algumas que
apenas haviam sido parcialmente descritas na literatura. A exposição à cisplatina deu
origem a várias aberrações cromossómicas como quebras de cromátides, formação de
cromossomas radiais, cromossomas pulverizados, placas metafásicas condensadas e
cromossomas minute e double minute. Foi ainda possível verificar, com o ensaio do
cometa, um efeito significativo das ligações cruzadas induzidas pela cisplatina na linha
celular 5637 (p < 0,01), para além de uma redução altamente significativa da actividade
proliferativa em ambas as linhas (p < 0,001), caracterizada essencialmente pela drástica
diminuição da marcação AgNOR.
Através da combinação das várias técnicas utilizadas foi possível concluir que a
linha celular mais afectada pelos efeitos genotóxicos da cisplatina foi a linha superficial 5637. More than 90% of all urothelial tumors originate on the bladder, being the
bladder transitional cell carcinoma (TCC) the most common form. Despite of its relative
“benign” nature, superficial TCCs have a relapsing rate up to 70%, 10 to 15% of which
progress to the muscle-invasive form of the disease. The in vitro study using bladder
cancer cell lines presents itself as a valuable clinical model to understand the disease, as
well in the research of antineoplastic drugs. There are presently around fifty bladder
cancer cell lines available, such as the 5637 and MCR cell lines, respectively of
superficial and metastatic origin.
Cisplatin (cis-diamminedichloroplatinum(II)), a platinated compound of
alkylating action, is a drug of wide application on the treatment of several types of
cancer, such as the bladder cancer. The predominant lesions are the intrastrand
crosslinks 1,2-d(GpG), which leads to the arrest of DNA transcription, replication and
repair.
The objective of the present work focused, in an initial stage, on the study of the
main chromosomal alterations found in 5637 and MCR cell lines by application of
several classic and molecular cytogenetic techniques. And after this, on the evaluation
of the cisplatin effect over these cell lines, at the level of DNA lesions and proliferative
activity, integrating cytogenetics, the comet assay, and the morphometric quantification
of AgNOR proteins.
It was possible to identify several chromosomal alterations on both cell lines,
some of which were described for the first time, as well to clarify some alterations that
had already been partially described in the literature. Cisplatin exposure gave rise to
several chromosomal aberrations such as chromatid breaks, radial chromosome
formation, pulverized chromosomes, condensed metaphase plates and minute and
double minute chromosomes. It was also possible to verify a significant effect of the
cisplatin-induced crosslinks in 5637 cell line with the comet assay (p < 0,01), in
addition to an extremely significant decrease of the proliferative activity in both cell
lines (p < 0,001), mainly characterized by a drastic reduction of the AgNOR staining.
Through the combination of the several employed techniques, it was possible to
conclude that the 5637 superficial cell line was the most affected by the genotoxic
effects of cisplatin. Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde
