Avaliação da interdependência entre histidinas cinases híbridas (BCAM0218, BCAM...

• Autor(es): Penas, Eunice Jorge, 1981-
• Data: 2012
• Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10451/8634
• Origem: Repositório da Universidade de Lisboa
• Assunto(s): Doenças transmissíveis; Burkholderia cenocepacia; Fibrose cística; Factores de virulência; Histidina; Teses de mestrado - 2013
• Tipo de Documento: Dissertação de Mestrado
• Idioma: Português
• Orientador(es): Fialho, Arsénio do Carmo Sales Mendes; Cristino, José Augusto Gamito Melo, 1957-

Descrição

Tese de mestrado, Doenças Infecciosas Emergentes, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2013 As bactérias do complexo Burkholderia cepacia (Bcc) apresentam capacidade de provocar infeções graves e persistentes em doentes com Fibrose quística (CF) e em imunocomprometidos. A sua fácil transmissibilidade, a resistência intrínseca a antimicrobianos e o conjunto de fatores de virulência que apresentam, tornam estas bactérias emergentes. Deste modo, o estudo aprofundado destas bactérias torna-se necessário para o esclarecimento da patogenicidade associada a estas estirpes bacterianas. Burkholderia cenocepacia elemento do Bcc, é uma estirpe epidémica pertencente à linhagem ET-12 na qual foi identificado um agrupamento de adesinas triméricas autotransportadas (TAA) com função determinante no processo de colonização do epitélio respiratório. A compreensão da regulação destas adesinas apresenta-se como uma oportunidade de novos alvos antimicrobianos. Neste projeto realizaram-se várias análises no sentido de perceber se as histinas cinases híbridas (HKs), BCAM0218 e BCAM0227, que flanqueiam o agrupamento TAA apresentam funções de regulação nos genes das adesinas. O estudo envolveu inicialmente análise computacional das HKs através da qual foi possível identificar algumas semelhanças em termos de estrutura secundária e, diferenças em termos de percentagens de identidade, principalmente na zona codificante para o sensor. Posteriormente, após avaliação de níveis de expressão dos genes do agrupamento TAA em cada um dos mutantes, B. cenopecacia K56-2 BCAM0218::Tp e B. cenopecacia K56-2 BCAM0227::Tp 0227, foi verificado através de ensaios em modelos biológicos: Galleria mellonella e células de epitélio pulmonar humanas 16HBE14o- e CFBE41o- (fenótipo não-CF e CF, respetivamente) e, de ensaios de hemaglutinação e resistência ao soro que existe interdependência entre as HKs híbridas e as adesinas do referido agrupamento TAA, quer a nível da resposta transcricional quer a nível de resposta fenotípica. Bacteria of the Burkholderia cepacia complex (Bcc) have the capacity to cause severe and persistent infections in patients with cystic fibrosis (CF) and immunocompromised. It´s easy transmissibility, intrinsic resistance to antimicrobial agents and the set of virulence factors present that make these bacteria emerging. Thus, detailed study of such bacteria it is necessary for the clarification of pathogenicity associated with these bacterial strains. B. cenocepacia element of Bcc is an epidemic strain belonging to the ET-12 strain was identified in which a group of trimeric autotransportadas adhesins (TAA) with decisive role in the process of colonization of the respiratory epithelium. Understanding the regulation of these adhesins presents an opportunity for new antimicrobial targets. In this project several analyzes were performed in order to understand if the hybrid histidines Kinases (HKs), BCAM0218 and BCAM0227, flanking the TAA group have regulatory functions in the genes of adhesins. The first study involved computer analysis of HKS whereby it was possible to identify some similarities in terms of secondary structure, and differences in terms of percentages of identity, particularly in the area coding for the sensor. Subsequently after evaluation of expression levels of genes in the cluster TAA each mutant B. cenopecacia K56-2 BCAM0218 :: Tp and B. cenopecacia K56-2 BCAM0227 Tp :: 0227, was verified by testing in biological models: Galleria mellonella and human lung epithelial cells 16HBE14o-and-CFBE41o (phenotype Non-CF and CF, respectively), and hemagglutination assays and resistance to serum interdependence that exists between the HKS and hybrid adhesins of that grouping TAA, both at the transcriptional response both in terms of phenotypic response.