Author(s):
Perpétuo, Inês Pedro 
Date: 2009
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10451/1796
Origin: Repositório da Universidade de Lisboa
Subject(s): Biologia molecular; Artrite reumatóide; Sistema imunitário; Teses de mestrado
Description
Tese de mestrado, Biologia (Biologia Molecular e Genética), 2009, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências A artrite reumatóide (AR) é uma doença sistémica que afecta particularmente as articulações, destruindo-as. Nesta patologia ocorre uma hiper-activação do sistema imunitário que não só conduz a inflamação crónica como estimula a reabsorção óssea por activação dos osteoclastos (OC). Estudos recentes mostraram que citocinas como a interleucina (IL)-1, IL-6 e o factor de necrose tumoral (TNF) para além de terem um papel fundamental na inflamação também estimulam a activação dos OC. Recentemente foram desenvolvidas novas terapêuticas para bloquear especificamente elementos chave desta doença como o TNF (anti- TNF) e a IL-6 (anti-receptor da IL-6, tocilizumab), as chamadas terapêuticas biológicas. Contudo não se conhece ainda o efeito exacto destas novas terapêuticas no osso humano. Nesse sentido, em doentes com AR sob diferentes terapêuticas (corticóides, metotrexato, anti-TNF e tocilizumab) foi estudado o ambiente inflamatório sistémico e local (na articulação) e a partir de precursores circulantes provenientes do sangue destes doentes foram diferenciados OC. A actividade das células diferenciadas foi avaliada através de ensaios funcionais e da expressão de genes específicos de OC, tracp, intb3 e cstk. Nesta investigação observou-se que, independentemente da actividade da doença, os corticóides não diminuem os níveis de citocinas na articulação e que as terapêuticas biológicas são as que melhor controlam o estímulo osteoclastogénico. Foi também observado que os doentes sob anti-TNF apresentam um atraso no pico de formação de OC e são aqueles onde a expressão de integrina αvß3 à superfície é mais baixa. Mais, observámos que nos monócitos a expressão basal de genes-chave é maior nos doentes apenas sob metotrexato quando comparados com os doentes sob terapêutica biológica. Por outro lado, a expressão génica em monócitos mostrou-se positivamente correlacionada com a actividade da doença levando-nos a especular que a expressão de genes que conduzem à diferenciação de monócitos em OC é influenciada pelo ambiente inflamatório. Rheumatoid Arthritis (RA) is a systemic disease that leads to joint destruction and is characterized by hyperactivation of the immune system that leads, not only to chronic inflammation, but also to stimulation of bone resorption by activation of osteoclasts (OC). Studies showed that several cytokines, namely interleukin (IL)-1, IL-6 and tumor necrosis factor (TNF), play a very important role in inflammation but also stimulate OC activation. Recently new therapeutic approaches were developed against key-players in RA like TNF (anti-TNF therapies) and IL-6 (anti-IL-6 receptor, tocilizumab), the so called biological therapies. However we still do not know what is the exact effect of the new therapeutics on human bone. In this work we studied the systemic and local (articular) inflammatory environment in RA patients under several therapies (corticoids, methotrexate, anti-TNF and tocilizumab) and we stimulated circulating monocytes from these patients to differentiate into OC. The activity of the cultured cells was accessed through two functional assays and by studying the expression OC-specific genes, tracp, intb3 and ctsk. We have found that, regardless of disease activity, corticoids don't regulate local cytokine levels and that the biological therapeutics are the ones that better control osteoclastogenic stimuli. We also observed that anti-TNF patients have a delay in OC formation and less αvß3 integrin surface expression. Moreover, it was found that in monocytes from methotrexate patients, the basal expression of key genes is higher than in patients under biological therapeutic. Monocytes genetic expression correlates with disease activity suggesting that the expression of genes in monocytes that lead to differentiation in OC is regulated by the inflammatory environment.
Document Type
Master Thesis
Advisor(s)
Canhão, Helena Cristina de Matos, 1967-; Telhada, Maria Margarida Blasques
