Autor(es):
Azevedo, Ana Raquel Andrade Castro 
Data: 2008
Identificador Persistente: http://hdl.handle.net/10451/1236
Origem: Repositório da Universidade de Lisboa
Assunto(s): Biologia celular; Embriologia; Citogenética; Teses de mestrado
Descrição
Tese de mestrado, Biologia (Biologia Evolutiva), 2008, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências Após a fecundação, uma percentagem de 2-7% dos zigotos humanos são monopronucleados (1PN), ou seja, não apresentam uma constituição morfológica normal de dois pronúcleos e dois glóbulos polares (2PN2PB). As causas genéticas do aparecimento destes zigotos não se encontram bem esclarecidas, havendo somente dois estudos realizados em zigotos 1PN, nos quais as causas apontadas são a activação partenogenética, degeneração uniparental do genoma e cariogamia. O objectivo deste trabalho foi tentar esclarecer qual a origem genética dos zigotos 1PN e os mecanismos celulares que ocorrem durante a sua formação. Para tal, fomos analisar 82 zigotos 1PN, 18 de ciclos de fertilização in vitro (IVF) e 64 de ciclos de microinjecção intracitoplasmática (ICSI), sob consentimento informado dos pacientes do Centro de Genética da Reprodução A. Barros (CGR). Os 82 zigotos e seus glóbulos polares foram analisados por hibridização in situ com fluorescência (FISH) para marcação dos cromossomas 18, 21, X e Y. Vinte e dois destes zigotos foram também analisados por Imunofluorescência (IF) com anticorpos para marcação das laminas nucleares e histona H3 tri-metilada na lisina 9 (MeH3K9). Os resultados observados indicam que nos zigotos 1PN estão presentes dois pronúcleos e não apenas um em 88% dos casos IVF e 42% dos casos ICSI. Os mecanismos de formação predominantes na ICSI são a não descondensação do espermatozóide (58%) e a ruptura prematura do invólucro nuclear (pPNBD) (42%) mecanismo aqui descrito pela primeira vez e que consiste numa desagregação precoce das laminas nucleares. Já na IVF, o mecanismo predominante foi a pPNBD (89%). Quanto à constituição cromossómica dos pronúcleos, 69.5% apresentaram uma constituição haplóide e 30.5% aneuplóide. Foram observados mecanismos novos de formação destes zigotos: pPNBD quer feminino quer masculino e cariocinese, não se confirmando a activação partenogenética, degeneração uniparental do genoma e cariogamia, previamente descritos After fertilization, 2-7% of the zygotes are unipronucleated (1PN), which means they do not display a normal morphological constitution of two pronuclei and two polar bodies (2PN2PB). The genetic causes of the appearing of these zygotes are not clear, and only two studies were done in 1PN zygotes, in which the reported causes are the parthenogenetic activation, uniparental genome degeneration and karyogamy. The objective of this study was trying to clarify what is the genetic origin of 1PN and the cellular mechanisms which occurs during their formation. For that, we analyzed 82 1PN zygotes, 18 from in vitro fertilization (IVF) cycles and 64 from intracytoplasmatic sperm injection (ICSI), under informed consent of the patients of the Centre for Reproductive Genetics A. Barros (CGR). The 82 zygotes and their polar bodies were analyzed by fluorescent in situ hybridization (FISH) to chromosomes 18, 21, X and Y. Twenty-two of these zygotes were analyzed by immunofluorescence (IF) too with nuclear lamins and histone H3 tri-methylated at lysine 9 antibodies. The results show that in 1PN zygotes, two and not only one pronuclei are present in 88% of IVF cases and 42% of ICSI cases. The ICSI predominant mechanisms of the formation of zygotes 1PN are the sperm non-decondensation (58%) and the premature pronuclear envelope breakdown (pPNBD) (42%) mechanism which is here first reported and that consists in a premature disassembly of nuclear lamins. In IVF, the predominant mechanism was the pPNBD (89%). In what concerns to the pronuclei chromossomical constitution, 69.5% were haploid and 30.5% were aneuploid. We observed new mechanisms of the formation of these zygotes: female and male pPNBD and karyokinesis, and we do not confirm the oocyte parthenogenesis, uniparental genome degeneration and karyogamy, previously described
Tipo de Documento
Dissertação de Mestrado
Orientador(es)
Sousa, Mário; Thorsteinsdóttir, Sólveig, 1962-
