Author(s):
Cortes, Helder Carola Espiguinha 
; Leitão, A. ; Waap, H. ; Vilares, A. ; Ângelo, H. ; Meireles, J.
Date: 2011
Persistent ID: http://hdl.handle.net/10174/6609
Origin: Repositório Científico da Universidade de Évora
Subject(s): Toxoplasma gondii; In vitro isolation
Description
O isolamento de Toxoplasma gondii é imprescindível quer para efeitos de diagnóstico definitivo da infecção, quer
para estudos visando a genotipagem de estirpes circulantes, tanto nos animais como no ser humano. O bioensaio é
presentemente considerado o método de eleição para isolamento de T. gondii de amostras biológicas, no entanto,
para além de eticamente questionável, a inoculação em ratinho é dispendiosa e laboriosa. O ensaio in vitro
utilizando culturas celulares é frequentemente mencionado como alternativa, contudo o investimento nesta área tem
sido diminuto, sendo raros os trabalhos que referem o recurso a este método para isolamento de T. gondii a partir de
tecidos animais. Este estudo teve como objectivo testar diferentes métodos de isolamento de T. gondii em culturas
de células. Para a preparação dos inóculos, colhemos amostras de tecido cerebral e muscular (coração e membros)
de 16 gatos serologicamente positivos, durante a necrópsia. O tecido cerebral foi homogeneizado com agulha e
seringa em meio de cultura e o tecido muscular digerido numa solução de ácido clorídrico e pepsina. A inoculação
dos homogeneizados de cérebro e músculo em culturas de células Vero resultou, respectivamente, numa taxa de
isolamento de 37,5% (6/16) e 62,5% (10/16). A visualização microscópica de taquizoítos nas culturas celulares foi
possível 5-14 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de cérebro e 7-32 dias pós-inoculação, utilizando
homogeneizados de tecido muscular. Todos os isolados foram confirmados por n-PCR visando a região ITS1 do
rDNA de T. gondii.
